ИГХ без страха: что это и зачем это нужно
Слово «иммуногистохимия» звучит как заклинание в духе «авада кедавра» или «экспекто патронум». Причём тут «иммуно», «гисто» и «химия»? Это про иммунитет, про гистологию или про школьные эксперименты на уроке химии?
Я помню себя, когда только начинала разбираться в ИГХ. Смотрю в микроскоп, вижу какие-то коричневые пятна — а в голове одна мысль: «Либо я сейчас угадаю, либо опозорюсь». Знакомо?
Сразу залечу с двух ног: ИГХ — это не игра в угадайку, не панацея и не всегда может дать ответ на вопрос. Но при этом, ИГХ — ещё один способ проверить свою гипотезу, и способ весомый.
Содержание
1. Сначала — глазами
2. Как это работает
3. Почему не всё так просто
4. Самая частая ошибка новичков
5. Про «слабую экспрессию», «фон» и прочую ерунду
6. Чувствительность и специфичность
7. Что дальше?
* * *
1. Сначала — глазами
Диагностика всегда начинается с одного и того же с гематоксилина и эозина. Это база. Если у нас не появилось предположений на этом этапе — скорее всего, и дальнейшее использование ИГХ превратится в гадание на кофейной гуще.
Итак, мы получаем препарат и садимся за микроскоп: смотрим на архитектуру, на форму клеток, на ядра, на характер роста опухоли. В части случаев всё становится понятно, и мы выдаём заключение, но иногда этого мало.
Допустим, мы предполагаем одну из двух опухолей: эндометриоидную аденокарциному high grade или серозную карциному эндометрия. Признаки похожие (крупные ядра, обилие митозов), но наверняка выбрать один из вариантов сложно. Поможет ИГХ.
Гематоксилин и эозин: серозная карцинома эндометрия с железистой дифференцировкой, которая может имитировать эндометриоидную аденокарциному high grade (и наоборот).
Бывает, опухоль вообще не имеет каких-то намёков на дифференцировку: мы не понимаем, с чем именно имеем дело, и клинические данные не помогают. Тут без ИГХ и вовсе не обойтись.
* * *
2. Как это работает
Представьте собаку, которая специализируется только на вынюхивании апельсинов и больше ничего не умеет. Ей ставят задачу найти апельсин, она обнюхивает пространство и находит всё, что пахнет именно так.
Говоря более научным языком, иммуногистохимия — это метод обнаружения специфических антигенов в клетках, за счёт реакции «антиген — антитело».
Мы капаем на ткань антитело, оно прикрепляется к «родным» антигенам по принципу «ключ-замок». Под микроскопом то, что сработало, выглядит коричневым (или красным, в зависимости от метода).
Принцип действия иммуногистохимического метода.
То есть, мы выявляем не сами опухоли, а белки, которые наиболее характерны для конкретных опухолей. В этом вся красота и сложность ИГХ.
* * *
3. Почему не всё так просто
Представим ситуацию: нам поступил кусочек лёгкого с опухолью.
Смотрим морфологию. Кажется, похоже на аденокарциному, в целом опухоль солидная, но есть намёки на железы. После анализа препарата, окрашенного гематоксилином и эозином, мы выдвигаем гипотезу: «Скорее всего, это аденокарцинома лёгкого».
Чтобы проверить гипотезу, мы берём маркер TTF-1, который характерен именно для лёгочного эпителия. Дальше возможны варианты.
Если TTF-1 позитивный — ура, наша гипотеза становится крепче, и мы на правильном пути. Если негативный — значит, либо это TTF-1-негативная аденокарцинома лёгкого, либо это другой рак лёгкого, либо вообще не опухоль лёгкого... Поди разберись!
В опухоли лёгкого нет экспрессии TTF-1, потому что это плоскоклеточный рак, там его и не должно быть, Зато есть экспрессия TTF-1 в альвеолах лёгкого — это тоже нормально.
В общем, ИГХ не ставит диагноз — она просто повышает или понижает вероятность нашего предположения. Это, пожалуй, самое важное, что нужно вынести из этой статьи.
* * *
4. Самая частая ошибка новичков
Существует огромный соблазн — назначать маркеры пачками, «на всякий случай». Давай закинем всё, на все деньги налогоплательщиков — авось что-то да выстрелит.
Я знаю, о чём говорю, потому что сама через это прошла.
Когда нет гипотезы, ИГХ превращается в казино. Мы получаем кучу пятен, не знаем, как это всё увязать друг с другом, и не понимаем, что с этим делать. Нет вопроса — нет и ответа.
Надо было начинать с анализа гемотоксилина и эозина!
ИГХ работает только тогда, когда мы чётко сформулировали, что именно хотим узнать. Не «Что это такое вообще?», а «Это аденокарцинома или плоскоклеточный рак?».
Алгоритм диагностики с помощью ИГХ.
В интернете вы можете найти множество подобных алгоритмов назначения ИГХ-антител. Они работают, и у них есть определённая логика: антитела назначаются поэтапно, а не все сразу. Принципы таких алгоритмов мы разберём в будущих статьях.
* * *
5. Про «слабую экспрессию», «фон» и прочую ерунду
Есть ещё пара моментов, которые могут ввести начинающего патолога в ступор.
Например, вы видите слабое, бледное окрашивание и думаете: «Наверное, это фон / артефакт / фигня какая-то». На самом деле, на это тоже нужно обратить внимание, потому что интенсивность цвета — это не всегда главное.
Главное:
1. Где именно окрасилось (в ядре, в цитоплазме или на мембране).
2. Сколько клеток дали реакцию (процент позитивных клеток).
3. Соответствует ли это здравому смыслу и биологии опухоли.
1. Где именно окрасилось (в ядре, в цитоплазме или на мембране).
2. Сколько клеток дали реакцию (процент позитивных клеток).
3. Соответствует ли это здравому смыслу и биологии опухоли.
Иногда слабое ядерное окрашивание говорит намного больше, чем яркая, но фоновая цитоплазма.
ИГХ-исследование рака молочной железы. При анализе результатов HER2 имеет значение как наличие/отсутствие, так и интенсивность окрашивания. Если мы видим слабое мембранное окрашивание — это не артефакт, а одна из особенностей опухоли.
* * *
6. Чувствительность и специфичность
Вернёмся к нашим собакам-детективам. В ИГХ есть два важных понятия: чувствительность и специфичность.
Чувствительность
Первая собака — чувствительная. Она унюхает апельсин за километр. Проблема в том, что она реагирует не только на апельсины. Она возбуждается на мандарины, лимоны, ароматизированное мыло «цитрус» и иногда даже на оранжевый мячик.
Такая собака полезна, когда нужно понять: «есть ли тут вообще что-то похожее на цитрус?» Это чувствительный, но неспецифический маркер. Он редко пропускает цель, но часто поднимает ложную тревогу.
Специфичность
Вторая собака — элитный кинологический спецназ. Она реагирует только на конкретный сорт апельсинов, выращенных на одном острове. Ни лимоны, ни мандарины её не интересуют, но нюх у неё менее чувствительный: если апельсин маленький, незрелый или спрятан глубоко — она может пройти мимо.
Это специфичный, но нечувствительный маркер. Если он сработал — перед нами почти наверняка нужный антиген. Но если не сработал, нельзя быть полностью уверенным, что «апельсинов» нет. Нужна помощь других «собак».
Примеры
В ИГХ то же самое.
Есть знаменитый объект неиссякаемых патологоанатомических шуток — маркер мезенхимальных клеток Виментин. Он входит в топ чувствительных и неспецифичных маркеров: красит большинство сарком, но часто срабатывает где попало, поэтому его очень редко используют в диагностических целях.
Виментин в светлоклеточном почечно-клеточном раке. Это абсолютно нормальная ситуация, так и должно быть.
А есть, например, TTF-1 — главный маркер для проверки на наличие аденокарциномы лёгкого. Он очень специфичный и почти наверняка не сработает там, где не надо. Засада в том, что TTF-1 не самый чувствительный и иногда просто-напросто не срабатывает при аденокарциноме лёгких (пропускает около 15-20%)! Несложно сбиться с пути.
TTF-1 в аденокарциноме лёгкого
Возможно, сравнение Виментина и TTF-1 выглядит как сравнение тёплого с мягким. Приведу пример из одной и той же «оперы».
Одна из самых злокачественных опухолей кожи — меланома. Иногда для постановки этого диагноза требуется ИГХ. Используют несколько маркеров — для примера возьмём S100 и HMB-45.
S100 — очень чувствительный маркер. Он срабатывает почти в 100% меланом. Но кроме меланом, он срабатывает во многих других клетках и структурах: дендритных клетках, нервной ткани, хрящах, миоэпителии — даже в некоторых карциномах.
S100 в меланоме.
S100 в шванноме.
Маркер HMB-45 обладает очень высокой специфичностью. Жаль, что он срабатывает не всегда: экспрессия может отсутствовать в самой меланоме, в метастазе меланомы. А при десмопластическом и веретеноклеточном типах меланомы вероятность экспрессии очень низка в принципе.
HMB45 в метастазе меланомы.
Именно поэтому не принято полагаться на один маркер: их назначают парами, тройками — а зачастую и более. Такие комплекты называются панелями.
* * *
7. Что дальше?
Вроде более-менее разобрались. Но как это применять каждый день?
Не стоит бояться коричневых пятен. Спокойно рассуждаем: «Так, гипотеза такая-то, маркер такой-то, результат такой-то. О чём это мне говорит?».
В следующих статьях (в платной подписке уровня «Мастер») мы разберём конкретные панели, конкретные ситуации и конкретные ловушки. Просто и понятно, как всегда.
Главное, что нужно запомнить: ИГХ — это вспомогательный метод, а морфология — всему голова.
Когда знания улягутся и опыт чуть-чуть накопится, ИГХ станет полезным инструментом в диагностике — ещё одним источником информации, как форма ядра или цвет цитоплазмы.
In bundle
игх
игх без страха
